เครื่องนึ่งฆ่าเชื้อ Autoclave ทำงานโดยอาศัยไอน้ำร้อนและแรงดันที่สามารถสร้างอุณหภูมิสูงพอที่จะทำลายเชื้อโรคต่างๆ โดยทั่วไปแล้วหม้อนึ่งแรงดันจะใช้สภาวะอุณหภูมิอยู่ที่ 121 องศาเซลเซียส(°C) แรงดันไอน้ำ 15 ปอนด์ต่อตารางนิ้ว (psi) และใช้ระยะเวลาในการฆ่าเชื้อ 15 นาที โดยประมาณ (ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับอุปกรณ์และประเภทของเชื้อโรคที่ต้องการกำจัด

 ซึ่งรอบในการนึ่งเพื่อฆ่าเชื้อโรคสามารถปรับได้ตามเหมาะสมตาม อุณหภูมิ (Temparature) ความดัน (Pressure) และระยะเวลา (Time) เพื่อสร้างไอน้ำอิ่มตัวภายในกรอบเวลาที่กำหนดที่สามารถฆ่าเชื้อจุลินทรีย์ได้ทั้งหมด รวมถึงการห่อและจัดเรียงอุปกรณ์และเครื่องมือแพทย์สำหรับเข้าหม้อนึ่งฆ่าเชื้อจะต้องไม่หนาจนเกินและและถูกจัดวางอย่างเหมาะสม เพื่อให้ไอน้ำภายในเครื่องนึ่งฆ่าเชื้อกระจายตัวและทำการฆ่าเชื้อโรคได้อย่างเต็มประสิทธิภาพการตั้งค่าอุณหภูมิได้ 3 แบบ